【求助】EAE模型？ 各位兄弟，大家好！我现在用MBP诱导雌性SJL/J小鼠EAE模型时，碰到一个很棘手的问题，动物发病很轻或者根本不发病。我的实验方法如下：雌性SJL/J小鼠18－22g背部皮下注射0.1mlMBP乳化液，分成3个点注射（两肩的背部正中为一个点，下背部左右各一个点），每个点0.033ml。0.1mlMBP乳化液的成分为：0.05mlMBP溶液（2mg/ml)+0.05mlCFA(含4mg/ml M.tuberculosis）。MBP免疫当天和2天后，i.p. PTX 400ng(溶于0.5ml的生理盐水）各一次。PTX溶解在玻璃瓶中，并用玻璃注射器注射。我现在可以观察到动物体重在免疫后有下降，14天左右极少数动物急性死亡（24h内，按照评分标准可评5分），少量动物尾巴无力（1分），但是绝大多数动物没有明显的发病表现。实验已经重复了四次，模型还是没有成功。我现在怀疑MBP（sigma公司）的量是否足够，有些文献上用到400-500 ng/只，而我仅为100 ng/只；其次，老鼠的品系是否有问题？渴望做过这个模型的兄弟与我交流，指点迷津!你好，我做过大鼠EAE模型，没用MBP，用的是自己做的豚鼠脊髓匀浆，效果很好。我怀疑是你的MBP量不够。另外，每次的乳化液是否充分混匀了，如果未充分混匀，可以导致发病不均匀。还有，注射时是否从针眼漏出过多，导致实际给的量不够，这都是需要注意的问题。另外，是否是皮下注射？位置扎的太深了也不行。不知你现在进行的怎么样了，祝你好运！我曾经进行这方面的工作我的意见如下：1。MBP是来自什么动物的？动物品系差别越大，越有助于模型诱导。MBP可以自己提取。2。有没有用合适的佐剂。结核菌素和百日咳毒素共同应用强于单一的弗氏完全佐剂。适当增加佐剂的量。3。现在大家常用的方法多是第一天和第七日注射。4。我见到好多文献上都采用这种小鼠。最好的动物应是LEWIS大鼠，但是国内可能不易获得这种大鼠存在着下丘脑垂体肾小腺皮质的障碍。谢谢caoc,guolin0724战友。我已经找到问题所在。我所用的SJL/J小鼠可能在长期传代过程中出现了基因突变导致对MBP诱导的敏感性下降，JAX动物实验室如是解释。现在我换用MOG35－55多肽诱导C57BL/6小鼠EAE，模型已成功。发病率100%，平均临床评分4分。很高兴，与众战友分享。同时如有同样问题的战友，希望对他们有启示！我是做大鼠 ， 效果还是可以 。可是没有文献上说的发病高峰期后能缓解。不知道你们做的是不是发病高峰期后都能缓解？筝子2004战友:我做过MBP诱导的雌性SJL/J小鼠EAE模型，MOG35－55多肽诱导的雌性、雄性C57BL/6小鼠EAE模型。MOG35－55多肽诱导的EAE模型较为成功，10天左右发病，26天左右达高峰，其后会一定的缓解，但是直到50天左右并不能完全缓解，平均临床积分为2－3分。MBP诱导的EAE模型不太成功，但是发病的小鼠在14天左右出现症状，最后能够完全缓解，因为发病鼠太少，也没有观察到再发。据文献和权威的实验指南介绍，大鼠发病出现于免疫后10－12天，大部分大鼠18-22天恢复。对于你的问题可考虑增加样本数，延长观察时间等方法，暂不考虑其他客观原因。希望对你有帮助！呵呵 谢谢你 我想可能是我用的剂量比较大。我使用的不是纯MBP 我用的抗原是牛脑白质匀浆。大鼠都发病，不过到了急性期后都死了。筝子2004战友:\"抗原是牛脑白质匀浆，急性期后都死了”。强！！！正如你所说，可考虑降低剂量（在保证高发病率和平均临床积分的前提下）。牛脑匀浆足够的话，可摸索一下不同的浓度，找到一个最佳剂量。祝成功！谢谢你 你提醒了我可以考虑不同的剂量 我试试看自从我提出这个问题以来，将国内在做类似研究的一些同仁聚到一起，共同讨论，共同学习，共同进步。近日收到汕头大学一封来信寄件人： g_rbchen@stu.edu.cn 拒收寄件人 添加到通讯录 收件人： littleford@sina.com 抄 送： 日 期： Mon, 17 Jan 2005 17:29:04 +0800 主 题： 你好！ 你好，我是汕头大学的，我在一个论坛上看到你发的文章，我也有很多疑惑。好像报导SJL/J小鼠还是比较敏感的。我是用豚鼠新鲜脊髓而不是用MBP诱导Wistar大鼠的，做了两次，动物也是没有明显的发病表现。我请教过一个做过猴子EAE模型的他说匀浆那个步骤很重要，一个要新鲜，一个要达到真正油包水状态，反复抽打上个钟头，我自己才用了20分钟左右，不知有没有关系。我准备再试一次，请问你的MBP是从哪里购买的，价钱如何呢？你有没有试过用脊髓匀浆而不是MBP诱导呢？你有没有尝试过加用百日咳疫苗，据说可以增加发病率。希望得到你的回音 陈荣波我将他的来信贴出来，希望大家能一如既往帮助他。我的回复如下：陈荣波见信好！1.MBP购自Sigma 公司，M 2295 5mg 169.60$ -20 C ；百日咳毒素（PTX）也购自Sigma 公司，(晶粉) P 7208 50ug 273.10$ 2－8 C；(水甘油剂) P 2980 50ug 299.60$ -20 C。2.我一直用MBP或者MOG,加腹腔注射PTX。没有用过脊髓匀浆，筝子2004 用过牛脑白质匀浆，具体事宜可向其咨询。PTX的确可以增加发病，有两个原因吧：增加单个核细胞通过血脑屏障的通透率，另外可起佐剂一样的作用。3.乳化十分重要。在CFA中乳化是否充分的标准并不是抽吸的时间，而是你滴一滴乳化物在水中，摇晃，如果不散开，既是油包水，即可。4.我做的是小鼠EAE模型，caocl 、筝子2004 战友成功做过大鼠EAE模型，请具体向他们咨询。欢迎你到来！祝你成功！我是用过百日咳毒素，感觉应该使用，因为我的发病率还可以g_rbchen@stu.edu.cn 你好。我们实验室最近一直在做这个Wistar大鼠的EAE模型。不同人操作，发病率的确稍有不同，估计和手法有关。我自己在操作中发病率（1分以上）可以达到95％以上，4分以上的也可以达到近75％。相应的文章我发表在《解剖学杂志》2001年第1期，你可以参阅。文中提到的注意事项相当详细，希望会对你有用。告诉你一个秘密：最主要的一点还是注射入足垫的手法，应该从鼠爪的根部向趾尖处的足垫内注射，保证每只鼠的注入量确实达到0.4ml以上。在拔出针头前按压住针眼数分钟，防止乳剂外漏。我们实验室的研究生按我上述方法改进后，动物的发病率显著提高。祝你好运！请问用SD大鼠是否也可以有较高的诱导率和临床症状评分？筝子2004 你用的是那种大鼠？SD大鼠和Wistar大鼠效果一样吗？我用的是SD大鼠,我的发病率除了注射的头一两天死去之外,基本上都发病了请问，是否用过重组鼠MOG1-125（rrMOG Igd)做过EAE模型啊；还有，MOG 可以在何处买到呢？gwyneth 战友,我没有做过MOG的EAE模型,我做的是用同种动物脑白质及脊髓匀浆诱发的EAE.MOG可以在sigma购得,国内北京舒伯伟公司是SIGMA的代理.0.5mg 是171.9美金刀刀偏左战友国外诱导EAE大鼠模型主要用Lewis大鼠。《解剖学杂志》2001年第1期77-81，用Wistar大鼠诱导EAE模型。其实SD和Wistar价格差不多，不妨一试！gwyneth战友DBA/1小鼠对MOG1-125敏感，C57BL/6小鼠对MOG35-55敏感。DBA/1小鼠国内不容易得到，MOG1-125 Sigma没有卖的，肽段太长合成起来也很贵。C57BL/6小鼠国内容易得到，MOG35-55 Sigma有售(M 4939: 0.5mg 171.9$).另外，上海生工可以合成。序列为：Met-Glu-Val-Gly-Trp-Tyr-Arg-Ser-Pro-Phe-Ser-Arg-Val-Val-His-Leu-Tyr-Arg-Asn-Gly-Lys，规格: 100 mg 价格: 10000元。我用的既是生工合成的，还行。前段时间太忙。集中回复发到我信箱的两个求助邮件！姓名及学校被我隐去了。寄件人： min song passionmin@yahoo.com.cn 拒收寄件人 添加到通讯录 收件人： littleford@sina.com 抄 送： 日 期： Tue, 1 Mar 2005 23:07:40 +0800 主 题： can you help me？ hi，你好。 我是一位在读的研究生，目前准备做EAE。但是不知何处有SJL/J小鼠，我从论坛上看到你的消息，请问你能告诉我哪儿有SJL/J卖吗？还有其他什么小鼠可以替代SJL/J吗？ 不胜感激^_^重庆宋×上海茂生>集中回复E-mail和Private Message 1.PTXbearballfyf战友：您好！我是武汉大学医学院03级研究生，明年就面临毕业。现正在进行自身免疫性心肌炎的研究，小鼠模型的诱导一直不很成功，反复找原因发现可能是应该加注百日咳毒素，因为目前小鼠心肌确实有免疫损伤，但是免疫损伤比较轻微。我按照您提供的信息（长春生物制品研究所 TEL：0431-7918110 0431-7921009-309上海生物制品研究所 电话：62803189 电邮：shsys@online.sh.cn兰州生物制品研究所 0931-8340377 8340477、8341888、8341888、8340877，postmaster@vacmic.com）每家单位都联系过了，但是均没有结果。所以冒昧的联系您，不知您现在还有没有做实验？有没有剩余的百日咳毒素可以转让一点？ 谢谢！drwufyf战友:你好!你在有关EAE模型的帖子里面提到:\"北京天坛生物制品股份有限公司生产百日咳杆菌疫苗和百日咳毒素。我曾经同他们联系过，他们声称\"根据国家有关生物技术管理规定和企业技术保护等需要，百日咳毒素概不出售”。你实验中用了这个的吧,请问你最后是从哪里买到的?你还提到\"我想如果你北京有人，找找GUAN XI，说说好话，花点QIAN，应该可以搞定。\" 我在北京没人,但钱不是问题,还有其他的途径可以得到么?多谢了,实验急需!我以前的PTX是在sigma买的，目录号7208，50ug 273.10美元。最近在国内找到一家生产并愿意提供PTX的单位，中国药品生物制品鉴定所。375ug 3800元人民币。电话：010-67017755-468。园子里有好多战友在找国产PTX，我也找过，见。战友们的心情我深有体会。将此消息与大家分享。2.我实验中MOG35-55、PTX的剂量寄件人： 032023015@fudan.edu.cn 添加到通讯录 拒收寄件人 收件人： littleford@sina.com 日 期： 05-08-16 11:50 主 题： 你好，求助 你好，我是复旦大学的，前段时间在上看到你的关于做C57小鼠EAE模型的帖子，你有没有发表过的相关文章，我还有些具体的东西不是很明白，比如免疫时的MOG的用量，我刚开始做这方面的东西，好多不懂，望百忙中给予指导，最好把您发表过的文章告诉我，多谢 寄件人： wuhui9068_cn@sina.com 添加到通讯录 拒收寄件人 收件人： littleford@sina.com 日 期： 05-09-08 11:54 主 题： 请教：有关EAE模型的问题 fyf战友:你好!看了你在有关EAE模型的帖子,收获很大.我也在进行相似的实验.但还有些问题比较疑惑,请不吝赐教!1.百日咳毒素国外的太贵了,你在国内买到过么?腹腔注射之前是否需要经过特殊处理(如灭活等)? 2.我在SIGMA买的FCA中含结核分支杆菌仅1MG/ML,是否会影响效果,如果添加的话能否直接将卡介苗加如到FCA中?这东西在哪里有卖的? 我前期的实验没用百日咳毒素,FCA也没加卡介苗,模型诱导很不理想。现在看了你们的经验，想改进下方法。以上疑惑之处请为解答，感激不尽！先谢了文章在整理中 200ug MOG35-55/只小鼠，s.c.；400ng PTX/只小鼠，i.p.，0天和2天各一次。wq75225战友的方法与我有一些区别，请同她联系！wuhui9068_cn战友的很多问题，这组帖子里都有，请仔细阅读！各位战友，我现在做预实验,大鼠致敏后第九天，没有发病迹象，请求帮助。我的实验过程是如下:1,提取抗原:将豚鼠断头杀死,游离出脊椎骨和脊髓,再用剪刀将脊椎骨剪开,暴露脊髓.将脊髓的脊膜和马尾去除.将脊髓加NS后在冰上用手动匀浆器捻碎半小时,(脊髓:NS = 1:1).取出的过程我自觉不能保证严格无菌,也不能时刻使脊髓在0度气温下,如剪脊椎骨是就得在室温下.剪出一个脊髓耗我25分钟。2,佐剂制作:是用5克羊毛脂配20ml石蜡油,温水浴混匀,之后高温消毒,高温消毒后再次摇匀使之充分混匀.4度保存,临用时加卡介苗,配成6mg/ml 的完全佐剂.加卡介苗时，因为量少（10ml)，我仅用一个玻璃注射器在15ml的小瓶中反复抽打（约半小时），而不是用两个玻璃注射器对抽。3,抗原与佐剂混匀:用两个玻璃注射器,之间的针头被焊接在一起.之后对抽40分钟.4,EAE模型制作:Wistar大鼠200克左右，每只两后足垫各皮下注射0.4ml抗原乳化液，尾根部皮下注射0.15ml百日咳疫苗(5.8亿/ml). 现在是致敏后第9天，老鼠无体重减轻而是增加、也无饮食变化，目前无发病迹象。盼各位战友能帮我查查原因，揪出错误。谢谢！各位战友，我现在做预实验,大鼠致敏后第九天，没有发病迹象，请求帮助。我的实验过程是如下:1,提取抗原:将豚鼠断头杀死,游离出脊椎骨和脊髓,再用剪刀将脊椎骨剪开,暴露脊髓.将脊髓的脊膜和马尾去除.将脊髓加NS后在冰上用手动匀浆器捻碎半小时,(脊髓:NS = 1:1).取出的过程我自觉不能保证严格无菌,也不能时刻使脊髓在0度气温下,如剪脊椎骨是就得在室温下.剪出一个脊髓耗我25分钟。2,佐剂制作:是用5克羊毛脂配20ml石蜡油,温水浴混匀,之后高温消毒,高温消毒后再次摇匀使之充分混匀.4度保存,临用时加卡介苗,配成6mg/ml 的完全佐剂.加卡介苗时，因为量少（10ml)，我仅用一个玻璃注射器在15ml的小瓶中反复抽打（约半小时），而不是用两个玻璃注射器对抽。3,抗原与佐剂混匀:用两个玻璃注射器,之间的针头被焊接在一起.之后对抽40分钟.4,EAE模型制作:Wistar大鼠200克左右，每只两后足垫各皮下注射0.4ml抗原乳化液，尾根部皮下注射0.15ml百日咳疫苗(5.8亿/ml). 现在是致敏后第9天，老鼠无体重减轻而是增加、也无饮食变化，目前无发病迹象。盼各位战友能帮我查查原因，揪出错误。谢谢！